Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

EPI400 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL(StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

简要说明：

EPI400菌株来源于 EC100菌株，将 EC100 核基因中控制质粒拷贝数的 pcnB基因删除后引入一个诱导启动子驱动的 pcnB基因，即是EPI400 菌株。 EPI400 菌株可以降低质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定DNA 或毒性基因的克隆，在加入诱导剂Copy Cutter InductionSolution后又可以提高质粒产量到正常状态。 [mcrA, Δ(mrrhsdRMS-mcrBC)]基因型使 EPI400 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。 recA1 和endA1 的突变有利于插入DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI400可用于蓝白斑筛选，tonA 赋予其抗噬菌体T1和 T5的能力，rpsL赋予其LIAN霉素抗性。EPI400感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

操作说明：

1. EPI400感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手bo打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。 

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰上融化。 

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。