Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

Turbo Chemically Competent Cell

基因型：

F'proA+B+ lacIqΔlacZM15 / fhuA2 Δ(lac-proAB) glnVgalK16 galE15 R(zgb-210::Tn10) TetS endA1thi-1 Δ(hsdSmcrB)5

简要说明：

Turbo 菌株是生长最快的大肠杆菌菌株。平板上6.5 小时可见克隆，营养液中摇菌 4-6小时可提取质粒，缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA 的产量和质量；Turbo 菌株可严格控制 laclq的表达，可以克隆毒性基因；fhuA2 突变赋予Turbo 菌株对噬菌体 T1的抗性； lacZΔM15的存在使 Turbo可用于蓝、白斑筛选。Turbo感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。

操作说明：

1. Turbo 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接产物） 并用手bo打 EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25 分钟。

2. 42℃水浴热激 45秒，迅速放回冰上并静置 2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌SOC 或LB培养基，混匀后 37℃，200 rpm复苏 60分钟。 

4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取 100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 SOC 或 LB培养基上。 

5. 将平板倒置放于37℃培养 6.5 小时以上。

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8 分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的 DNA 时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。