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Stbl3感受态细胞的简要说明

更新时间:2025-02-26      点击次数:129
Stbl3菌株来源于HB101 E.coli strain,是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。基因组含有重组酶recA13突变,可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有LIAN霉素抗性,不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。 
High5TM系列Stbl3感受态细胞经特殊工艺制作,经pUC19检测转化效率>108cfu/μg DNA。
操作说明:
1.Stbl3感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手打EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。 
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 
3.向离心管中加入0.9mL室温S.O.C.培养基或LB培养基(推荐使用SOC培养基,可提高转化效率)。
4.30℃,225rpm复苏90分钟。(当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control PUC19计算转化效率,则需37℃,225rpm复苏60分钟。) 
5.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C.培养基上。 
6.将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。(若转化controlPUC19计算转化效率,则需37℃培养过夜)

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