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Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

简要描述:EPI300 Chemically Competent Cell/Chemically Competent Cell克隆感受态细胞
保存条件:-80℃

  • 产品型号:EPI300
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-21
  • 访  问  量:157

详细介绍

品牌Abnbio货号ABG025-50
规格50支100ul供货周期现货
主要用途细胞培养应用领域化工,生物产业,制药

EPI300 Chemically Competent Cell

基因型:

F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ–rpsL nupG trfA dhfr。

简要说明:

EPI300细胞含有一个突变的trfA基因,该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁,诱导剂Ⅰ可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时,trfA基因的表达被抑制,ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平;当在培养基中加入诱导剂Ⅰ,ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平,提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数,特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr-hsdRMS-mcrBC]基因型使EPI300菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(例如:哺乳动物基因组DNA)。

recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。lacZΔM15 标记的存在使EPI300可用于蓝白斑筛选,rpsL赋予其lian霉素抗性。EPI300感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率可达3×108cfu/μg DNA

操作说明:

1.EPI300感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手bo打EP管底混匀,冰中静置25分钟。 

2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基,混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4.5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15 h。

注意事项:

1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。 

2.混入目的DNA时,应轻柔操作。



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