Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受态细胞

基因型

Δ(araleu)7697ΔlacX74phoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F[lac+lacIqpro]gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2(CamR,StrR , TetR )

简要说明

Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株聚合了不同原核表达菌株的优势：Rosetta-gami赋予其Rosetta和Origami的优点——补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC， GGA) 对应的tRNA，提高外源基因的表达水平，并且包含突变的硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase）(trxB)和gu胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区（DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶），适合T7启动子诱导的蛋白表达。该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7 yu菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有ka那霉素，lu霉素，lian霉素，四环素抗性，经pUC19质粒检测转化效率高达107cfu/μg。

操作说明

1、取100μl冰上融化的 Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含34 µg/ml lu霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。 

6.菌株携带 pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml lu霉素，以防质粒丢失。

7.具有ka那霉素抗性，不能用于具有ka那霉素抗性质粒的表达。