发根(电击)感受态细胞如何保存呢

发根农杆菌电击感受态细胞的保存方法主要分为短期和长期两种，核心是通过低温环境抑制细胞代谢、维持细胞膜通透性，同时避免细胞冻融损伤。

一、短期保存（数天至1周）

适用于制备后1周内需要频繁使用的场景，核心是“4℃短期低温暂存”，避免反复冻融导致活性下降。

‌保存条件与操作温度‌：4℃冰箱（冷藏层，非冷冻层）。容器：使用无菌的1.5mL离心管（已分装为单次使用量，如50μL/管或100μL/管），管口需拧紧防止污染。

‌时间‌：最长不超过7天，建议3天内使用完毕（超过7天后转化效率会显著下降，可能降低50%以上）。

‌注意事项‌：严禁反复从4℃取出后室温放置（室温会加速细胞代谢，破坏感受态状态），每次取用时快速挑取所需管数，剩余立即放回4℃。若短期保存后需长期储存，不可直接转入-80℃，需重新制备（4℃保存的细胞细胞膜状态已不稳定，直接冷冻易破裂）。

二、长期保存（数月至数年）

适用于大量制备后长期备用的场景，核心是“低温冷冻（-80℃或液氮）+抗冻剂保护”，减少冰晶对细胞的物理损伤。

‌核心保护剂‌：甘油（常用）。感受态细胞制备后需加入终浓度10%-15%的无菌甘油（甘油需提前灭菌，避免污染；浓度过低则抗冻效果不足，过高会导致细胞脱水）。具体操作：制备好的感受态细胞悬液中，按体积比加入无菌甘油（如900μL细胞悬液+100μL无菌甘油，终浓度10%），轻轻吹打混匀（避免剧烈振荡破坏细胞膜）。

‌分装‌：分装为单次使用量（50μL/管或100μL/管），每管体积不宜过大（过大冷冻/解冻时温度变化慢，易损伤细胞）。

‌标签‌：每管需标注感受态细胞的基因型、制备日期、甘油浓度，避免混淆。