Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

HB101 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1 rpsL20 (strR) glnV44λ-

简要说明：

HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的杂合产物（同时也是Stbl3的原始菌株）。recA13突变可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失内切酶系统，增强了外源DNA的稳定性和提取质量；此菌株具有LIAN霉素抗性；不存在lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。  High5TM系列HB101感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率>5×108cfu/μg。

操作说明：

1.HB101感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌体处于冰水混合状态时，加入目的DNA（质粒或连接产物并用手打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB无菌培养基，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。 

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.感受态细胞处于冰水混合状态时立即插入冰上。 

2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 

3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。 

4.操作过程中勿将感受态暴露于氧化性环境中，例如超净台应将臭氧排净后再使用。