Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

Chemically Competent Cell克隆感受态细胞     Mach1-T1 Chemically Competent Cell 

基因型：

F- φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74 hsdR(rK- mK+) ΔrecA1398endA1 tonA

简要说明：

Mach1-T1 菌株由野生型 non-K-12 E. Coli W 菌株改造而来，是目前生长速度较快的感受态细胞之一，在平板上 9 h 可见克隆，缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒 DNA 的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA1398)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入 DNA 的稳定性；lacZ M15 的存在使 Mach1-T1 可用于蓝、白斑筛选；tonA 突变赋予 Mach1-T1 菌株对噬菌体T1 和 T5 的抗性。Mach1-T1 感受态细胞 经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率>5x108 cfu/μg DNA

操作说明：

1.Mach1-T1 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌块融化，加入目的 DNA（质粒或连接 产物）并用手打 EP 管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置 25 分钟。

2.42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入 700 μl 不含抗生素的无菌2YT 或 LB培养基，混匀后 37℃，200 rpm 复苏 60 分钟。

4.5000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。

5.将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 13 h。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间 存放会降低转化效率。

2.混入目的 DNA 时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。