Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

基因型：

F´{lacIq Tn10 (TetR)} mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1araD139∆(ara-leu)7697 galUgalK rpsL endA1 nupG

简要说明：

TOP-10F`菌株来源于TOP-10菌株。将F`{lacIq Tn10 (TetR)}因子转入TO-P10菌株，即为TOP-10F`。该F`因子携带lacIq 抑制子，可抑制trc，tac，lac等启动子下游基因的表达，从而可以用于一些表达毒性蛋白质粒的扩繁。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。 TOP-10F’可用于构建克隆，蓝白斑筛选（如用于蓝白斑筛选，需在培养基中加入IPTG诱导β-半乳糖苷酶基因的表达）实验，具有四环素抗性。 High5TM系列TOP-10F`感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg。

操作说明：

1.TOP-10F`感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手打EP管底轻轻混匀，冰中静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB无菌培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选，将平板放37℃培养至少13h。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时 间过长，长时间存放会降低转化效率。

2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。