Chemically Competent Cell感受态细胞

基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR)endA1 nupG

简要说明：

TOP-10菌株来源于MC1061菌株， 是目前实验室常用的感受态细胞之一，基因型与DH10B高度类似（DH10B为galE15型，而TOP-10为galU型）。 TOP-10生长速度快（比DH5α快，但比Mach1-T1生长速度慢），10小时可见克隆， recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验。 High5TM系列TOP-10感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg。

操作说明：

1. TOP-10感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目 的DNA（质粒或连接产物）并用手打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB无菌培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13h。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰上融化。冰上放置大约5分钟即可融化，融化后8分钟内加入质粒，否则会影响转化效率。

2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

 3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。