酵母感受态细胞是通过特殊处理(如化学或物理方法)使酵母细胞暂时具备吸收外源DNA能力的细胞,主要用于基因克隆、蛋白表达及酵母双杂交等分子生物学实验。
转化成功的判断标准:
菌落形态与数量:
成功转化的酵母感受态细胞在选择性培养基上应形成乳白色、圆形、直径≥1mm的单菌落。
若菌落过小(<0.5mm)或呈弥散状(一层菌膜),则可能为转化失败。
转化效率验证:
单质粒转化效率通常需达到10³~10⁵cfu/μgDNA。
文库转化时,需在缺陷平板上获得≥10⁵个转化子(如10μL重悬液涂布后菌落数≥10个。
转化失败的常见原因及排查:
质粒问题:
电泳检测质粒是否完整(条带明亮、大小正确)。
检查质粒是否携带正确的筛选标记。
培养基与操作问题:
确认选择性培养基配制正确(如抗生素浓度、营养缺陷型补充)。
热激条件需严格(30℃孵育30min+42℃热激20min)。
细胞状态异常:
镜检酵母细胞是否形态正常(卵圆形、无裂解)。
活细胞比例需高(可通过亚甲基蓝染色法验证,活细胞无色)。