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Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

简要描述:BJ5183 Chemically Competent Cell/Chemically Competent Cell克隆感受态细胞
保存条件:-80℃

  • 产品型号:BJ5183
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-21
  • 访  问  量:80

详细介绍

品牌Abnbio货号ABG020-50
规格50支100ul供货周期现货
主要用途细胞培养应用领域化工,生物产业,制药

BJ5183 Chemically Competent Cell

基因型:

endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)

简要说明:

BJ5183是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌株,是目前腺病毒系统常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变,赋予BJ5183细胞较强的重组能力,有利于转入的目的基因与腺病毒质粒{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5genome (E1/E3 deleted)]或pAdeasy-2[encodes theAdenovirus-5 genome (E1/E3/E4 deleted)]}的重组。endA1(缺失核酸内切酶)的突变有利于重组DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。StrR赋予BJ5183菌株lian霉素抗性。BJ5183感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率>5×108 cfu/μgDNA。

操作说明:

1.BJ5183感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌块融化,加入目的质粒(含有目标基因并线性化)和腺病毒质粒,并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。 

2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的2YT或LB无菌培养基,混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。 

4.5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项:

1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。 

2.混入目的DNA时应轻柔操作。 

3.BJ5183菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后,可选择在其他大肠杆菌菌株中扩繁,纯化质粒。 

4.BJ5183感受态细胞对温度敏感,应储存在-80℃超低温冰箱,避免温度波动,温度波动会降低感受态转化效率。


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