Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

XL2-Blue Chemically Competent Cell

基因型：

TetRΔ(mcrA)183 Hte[F′{proAB lacIqlacZM15Tn10(TetR)AmyCamR}](mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1supE44thi-1 recA1 gyrA96 relA1

简要说明：

XL2-Blue菌株来源于XL1-Blue菌株，为Hte(hightransformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene开发的特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型，已成功应用于40kd质粒的构建。Hte使得XL2-Blue适用于大质粒DNA和重组产物的转化，降低片段大小的偏爱性，多用于文库构建。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。hsdSMR突变导致EcoK核酸内切酶系统缺失，增强了外源DNA的稳定性和提取质量。 lacZΔM15 的存在使XL2-Blue菌株可用于蓝、白斑筛选。此菌株具有四环素和LU霉素抗性。High5TM系列XL2-Blue感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率>1×109cfu/μg。

操作说明：

1.XL2-Blue感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。 

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB无菌培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少14h。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰上融化。 

2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。