Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

XL1-Blue MRF`Kan Chemically Competent Cell      保存条件：-80℃

基因型：

∆(mcrA)183 ∆(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1recA1 gyrA96 relA1 lac [F´proAB lacIqZ∆M15 Tn5 (KanR)

简要说明：

XL1-Blue MRF’Kan 菌株来源于 XL1-Blue 株系，是限制酶系统缺失型[∆ (mcrA)183, ∆ (mcrCB-hsdSMR -mrr)173],且具有KA那霉素抗性 (Kanr )，可转化具有lu霉素或四环素抗性的质粒。recA1 和 endA1 的突变 有利于插入 DNA的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。hsdR17 突变导致 EcoK 核酸内切酶系统缺失，增强了 外源 DNA 的稳定性和提取质量。lacI q ZΔM15 的存在使 XL1-Blue MRF’Kan 菌株可用于蓝、白斑筛选。 XL1-Blue MRF’Kan 感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

操作说明：

1.XL1-Blue MRF’Kan 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌块融化，加入目的 DNA 并用 手打 EP 管底充分混匀，冰中静置 25 分钟。

2.42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入 700 μl 不含抗生素的无菌培养基 (2YT 或LB)，混匀后 37℃，200 rpm 复苏 60 分钟。

4.5000 rpm离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。

5. 将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中 8 分钟内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存 放会降低转化效率。

2.XL1-Blue MRF’Kan 感受态细胞具有KA 那霉素抗性，不可转化具有KA 那霉素抗性的质粒。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。