Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

 JM110 Chemically Competent Cell

基因型：

rpsL (StrR) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsxdam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proABlacIqlacZΔM15]

简要说明：

JM110菌株具有硫酸-(StrR)  LIAN霉素抗性(StrR) ；是甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，提取得到的质粒DNA，可被对dam、dcm甲基化敏感的内切酶切割； lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以进行蓝白斑筛选，但转化效率不高  High5TM系列JM110感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19 质粒检测转化效率约107 cfu/μg。一般不用于质粒构建，只适用于质粒转化。

操作说明：

1.JM110感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA并用手打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB无菌培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰上融化。冰上放置大约5分钟即可融化，融化后不可久放，八分钟内加入质粒，否则会影响转化效率。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。