咨询热线

18156995113

当前位置:首页   >  产品中心  >  Abnbio感受态细胞  >  酵母 感受态细胞  >  Y187Chemically 酵母感受态细胞

Chemically 酵母感受态细胞

简要描述:Y187 Chemically Competent Cell/Chemically 酵母感受态细胞
保存条件:-80℃

  • 产品型号:Y187
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-27
  • 访  问  量:115

详细介绍

品牌Abnbio货号ABG703-50
规格50支100ul供货周期现货
主要用途细胞培养应用领域化工,生物产业,制药

Y187 Chemically Competent Cell  酵母感受态细胞

基因型:

MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101, trp 1-901, leu 2-3,112, gal4Δ, met–, gal80Δ, URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATAlacZ, MEL1

简要说明:

Y187菌株是GAL4系统酵母单杂,双杂实验用菌株,MATα型,可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株 (Y2HGold,AH109等)通过mating操作进行筛库试验。Transformation marker为: trp1,leu2,报告基因为:lacZ,MEL1。Y187有两个报告基因:lacZ,MEL1,分别由两种不同的启动子 (G1,M1)启动,这两种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同,其余部分均不同,大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。Y187感受态细胞经特殊工艺制作,pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

操作说明:

1. 取pBait-AbAi质粒5µg,BstBI或 BbsI酶切1h,回收;

2. 取一支无菌的1.5ml EP管,依次加入预冷的预冷的线性pBait-AbAi质粒1-5 µg(体积不高于15 µl),Carrier DNA(95-100 度5min 快速冰浴,重复一次)10µl,100µl冰上融化的Y1HGold感受态细胞,PEG/LiAc 500µl,轻轻翻转混匀6-8次;

3. 30℃水浴30min,每10min轻轻翻转混匀6-8次;

4. 每支加入20µl的二甲基亚砜(用以提高转化效率,可不做);

5. 42℃水浴15min,每5min轻轻翻转混匀6-8次;

6. 12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1ml的YPD Plus(YPDA)于30℃复苏1h(用以提高转化效率,可不做);

7. 12000rpm瞬时离心弃上清,用100µl 0.9% NaCl重悬,涂板,30℃培养48-96h。

注意事项:

1.PEG在低温下易析出,请在常温下wan全溶解后使用。

2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4.Y1HGold酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。

5.菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,Y1HGold的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylaminoimidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆。





产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

联系我们

合肥恩派尔贸易有限公司 公司地址:安徽省合肥市高新区黄山路624号桑夏精英时代广场507室   技术支持:化工仪器网
  • 联系人:刘畅
  • QQ:3644884546
  • 公司传真:4009005473
  • 邮箱:3644884546@qq.com

扫一扫 更多精彩

公众号

小程序