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M15(pREP4) 感受态细胞

简要描述:M15(pREP4) 感受态细胞 保存条件:-80℃ 基因型F-, Φ80ΔlacM15, thi, lac-, mtl-, recA+,KmR

  • 产品型号:ABG223-50
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-27
  • 访  问  量:69

详细介绍

品牌Abnbio货号ABG223-50
规格50X100ul供货周期现货
主要用途感受态细胞应用领域环保,食品,化工,生物产业,制药

基因型

F-, Φ80ΔlacM15, thi, lac-, mtl-, recA+,KmR


简要说明

M15(pREP4)蛋白表达菌株含有pREP4质粒,该质粒通过p15A复制子启动复制,可以与许多原核表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中;同时该质粒携带lac I基因,可高效表达lac抑制蛋白,在IPTG诱导前可抑制目标蛋白的本底表达,特别适合毒性基因的表达。M15(pREP4)菌株是PQE系列质粒的配套菌株,特别适合PQE系列质粒或由E.coli T5 启动子诱导表达的质粒的蛋白表达。pREP4质粒赋予该菌株ka那霉素抗性。M15(pREP4)感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达2×108cfu/μg DNA。


操作说明

1、M15(pREP4)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手拨EP管底混匀,冰中静置25分钟。 

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上(若质粒浓度较高,也可稀释后涂板,务必保证能在平板上挑到单克隆菌落)。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养,M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时,需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的ka那霉素。


注意事项

1、感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时,需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的ka那霉素。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。













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