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JM109(DE3) 感受态细胞

简要描述:JM109(DE3) 感受态细胞 保存条件:-80℃ 基因型endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+)relA1supE44D(lac-proAB) [F´ traD36 proAB laqI qZΔM15](DE3)

  • 产品型号:ABG222-50
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-27
  • 访  问  量:79

详细介绍

品牌Abnbio货号ABG222-50
规格50X100ul供货周期现货
主要用途感受态细胞应用领域环保,食品,化工,生物产业,制药

基因型

endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+)relA1supE44D(lac-proAB) [F´ traD36 proAB laqI qZΔM15](DE3)


简要说明

JM109(DE3)菌株来源于JM109,用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,该区整合于JM109的染色体上,所以称为JM109(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。JM109(DE3)菌株不可用于蓝白斑筛选试验。JM109(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率高于108 cfu /μg DNA。


操作说明

1、JM109(DE3) 感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌块融化,加入目的DNA并用手拨EP管底混匀,冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基,混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注意事项

1、感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。

4. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。













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