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Cassification
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详细介绍
品牌 | Abnbio | 货号 | ABG221-50 |
---|---|---|---|
规格 | 50X100ul | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 感受态细胞 | 应用领域 | 环保,食品,化工,生物产业,制药 |
基因型
F- λ- fhuA2[lon] ompT lacZ::T7gene1 gal sulA11Δ(mcrCmrr)114::IS10R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]
简要说明
ER2566菌株是NEB公司开发的具有超高转化效率的蛋白表达原核菌株,来源于BL21。Lac启动子启动下游T7RNA聚合酶的表达,可用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达。fhuA2赋予ER2566菌株对噬菌体T1的抗性。同时ER2566为lon和 ompT蛋白酶缺陷菌株。Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺失能够有效抑制表达的异源蛋白在大肠杆菌体内的降解,Δ(mcrC-mrr)114,mcr-73突变的存在使ER2566菌株无法对外源DNA进行标记、限制,提高了外源甲基化DNA的转化效率。AngYuBio High5TM系列ER2566感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达109 cfu/μg DNA。
操作说明
1、取100μl冰上融化的ER2566感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基,混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1、取100μl冰上融化的ER2566感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基,混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
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