当前位置:首页 > 产品中心 > Abnbio感受态细胞 > 表达 感受态细胞 > ABG220-50Tuner(DE3) 感受态细胞
Cassification
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详细介绍
品牌 | Abnbio | 货号 | ABG220-50 |
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规格 | 50X100ul | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 感受态细胞 | 应用领域 | 环保,食品,化工,生物产业,制药 |
基因型
F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)
简要说明
Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因(半乳糖苷透性酶基因)突变株,此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞,产生更加严格、均一的浓度依赖。此菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,该区整合于Tuner的染色体上,所以称为Tuner(DE3),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。Tuner(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率达107cfu/μg。
操作说明
1、取100μl冰上融化的Tuner(DE3)感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基,混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1、感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.诱导时,IPTG浓度可选(0.1-40mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
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