Origami2(DE3) 感受态细胞

基因型

Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoRaraD139ahpCgalE galK rpsL F′[lac+ lacIq pro] (DE3)gor522::Tn10trxB (StrR, TetR)

简要说明

Origami 2系列菌株是K-12菌株衍生而来，在thioredoxinreductase (trxB)和glutathione reductase(gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。与Origami系列菌株相比，Origami 2系列菌株是卡那敏感的，这使得该菌株能够适用于大多数的蛋白表达质粒。Gor基因突变使得该菌株和原来的Origami(DE3)菌株一样具有四环素抗性。DE3是溶源性的λDE3,所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。Origami2 (DE3)同时还是liang氨酸生长缺陷型宿主菌,可用于相关的克隆以及蛋白表达,在IPTG的诱导下可进行蛋白表达。Origami2 (DE3) 感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg。

操作说明

1、取100μl冰上融化的Origami2(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。