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Electroporation发根(电击)感受态细胞

简要描述:MSU440 Electroporation-Competent Cell/Electroporation发根(电击)感受态细胞
保存条件:-80℃

  • 产品型号:MSU440
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-25
  • 访  问  量:121

详细介绍

品牌Abnbio货号ABN408-50
规格50支100ul供货周期现货
主要用途细胞培养应用领域化工,生物产业,制药

MSU440 Electroporation-Competent Cell 发根(电击)感受态细胞

基因型:

Agrobacterium rhizogenes(strR ) MSU440 Ri (agropinetype)

简要说明:

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,胡萝卜,甘草等),同时具有ka那霉素抗性。MSU440发根农杆菌电转感受态特别适用于大质粒的转化:经pK7WGF2质粒 (size:11876 bp)检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

操作说明:

一: 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。

二: 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入0.01-1 μg质粒DNA(体积不大于6ul,最好用试剂盒抽提,双蒸水溶解;转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手bo打管底混匀,立即插入冰中,用200μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。

三:启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数为Biorad 推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯从冰中拿出,吸水纸吸干外表面水份,快速放入电转槽中,启动电击,电击完成快速插入冰中,加入1 ml无抗生素的TY,并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。

四: 6000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的TY平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天。

注意事项:

一:加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

二: 电转感受态细胞中不可混入气泡,转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

三:平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量或最终用于涂板的菌量。

四:MSU440具有lian霉素抗性,不可用于具有lian霉素抗性质粒的转化。

备注:

1、农杆菌相关抗生素配方:

image.png

2、常用农杆菌抗性:(R:抗;S:敏感。)

image.png

3、TY配方(1L):

Tryptone 5gYeast extract 3g补水到1L体积,wan全溶解后,121度、20分钟高温灭菌配制1M的氯化钙水溶液,121度、20分钟高温灭菌每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。若配制TY固体培养基,则加入15g 琼脂粉。




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