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Cassification
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详细介绍
品牌 | Abnbio | 货号 | ABG207-50 |
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规格 | 50X100ul | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 感受态细胞 | 应用领域 | 环保,食品,化工,生物产业,制药 |
基因型
F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ galλ(DE3)endAHte[argUileY leuW Camr ]
简要说明
CodonPlus(DE3)-RIL菌株来源于Stratagene公司的BL21-Gold 菌株,缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶,从而减少对重组蛋白的降解,补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA) 对应的tRNA (argU、ileY、leuW),提高外源基因,尤其是富含AT-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达,具有lu霉素抗性。BL21- Codon Plus(DE3)-RIL 感受态细胞由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
操作说明
1、取100μl冰上融化的AngYuBio BL21-CodonPlus(DE3)-RIL感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基,混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1、感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
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