BL21-CodonPlus (DE3)-RIL 感受态细胞

基因型

F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ galλ(DE3)endAHte[argUileY leuW Camr ]

简要说明

CodonPlus(DE3)-RIL菌株来源于Stratagene公司的BL21-Gold 菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子(AGA、AUA、CCC、CUA) 对应的tRNA （argU、ileY、leuW），提高外源基因，尤其是富含AT-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区（DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶），可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，具有lu霉素抗性。BL21- Codon Plus(DE3)-RIL 感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。

操作说明

1、取100μl冰上融化的AngYuBio BL21-CodonPlus(DE3)-RIL感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。