Chemically发根(热激)感受态细胞

Ar 1193 Chemically Competent Cell  发根(热激)感受态细胞

基因型：

Agrobacterium rhizogenes(strR ) MSU440 Ri (agropine type)

简要说明：

发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。 MSU440发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，茶树，青蒿等），同时具有lian霉素抗性。MSU440化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（ka那霉素抗性）检测，转化效率>104 cfu/μg DNA

操作说明：

一：取-80℃保存的Ar A4发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

二：每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈bo打管底混匀或用枪吹吸混匀，依         次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

三：冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY 液体培养基，于 28℃振荡培养 2小时。

四：6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天

注意事项：

一：加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

二：混匀质粒时应用手指快速bo打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌             量。

三：平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

四：Ar.1193具有羧苄qing霉素、lian霉素、li福平抗性，不可用于具有羧苄、lian霉素或li福平抗性质粒的转化。

备注：

1、农杆菌相关抗生素配方：

2、常用农杆菌抗性：（R：抗；S：敏感。）

3、TY配方（1L）：

Tryptone 5gYeast extract 3g补水到1L体积，wan全溶解后，121度、20分钟高温灭菌配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉