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Cassification
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详细介绍
品牌 | Abnbio | 货号 | ABN401-100 |
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规格 | 100支100ul | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 细胞培养 | 应用领域 | 化工,生物产业,制药 |
Ar Qual Chemically Competent Cell 发根(热激)感受态细胞
基因型:
Agrobacterium rhizogenes (strR,CamR ) Ar Qual Ri(agropine type)
简要说明:
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.Qual发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,番茄,柑橘等),同时具有lian霉素,lu霉素抗性。Ar.Qual化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒(ka那霉素抗性)检测,转化效>104 cfu/μgDNA。
操作说明:
一:取-80℃保存的Ar A4发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。
二:每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量),用手快速、剧烈bo打管底混匀或用枪吹吸混匀,依 次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
三:冰浴中拿出放室温,加入700μl 无抗生素的TY 液体培养基,于 28℃振荡培养 2小时。
四:6000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上,倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天
注意事项:
一:加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
二:混匀质粒时应用手指快速bo打管底或用枪吹吸混匀,务必使质粒快速、均匀分散开,与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌 量。
三:平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
四:Ar.Qual具有lian霉素、lu霉素抗性,不可用于具有lian霉素抗性或lu霉素抗性质粒的转化。
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