BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 感受态细胞

基因型

F–ompT hsdS(rB–mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3)endAHte[argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]

简要说明

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株来源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，从而减少对重组蛋白的降解，补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子(AGA,AUA,CCC,CUA)对应的tRNA (argU, ileY, proL, leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在原核系统中的表达水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列、pGEX、pMAL等质粒的蛋白表达，同时具有四环素，lu霉素，lian霉素，壮guan霉素抗性。BL21- CodonPlus(DE3)-RIPL感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/µg DNA。

操作说明

1、取100μl冰上融化的BL21-CodonPlus(DE3)-RIL感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。