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BL21 Star(DE3) 感受态细胞

简要描述:BL21 Star(DE3) 感受态细胞 保存条件:-80℃ 基因型F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)

  • 产品型号:ABG204-50
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-25
  • 访  问  量:72

详细介绍

品牌Abnbio货号ABG204-50
规格50X100ul供货周期现货
主要用途感受态细胞应用领域环保,食品,化工,生物产业,制药

基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)


简要说明

BL21 Star(DE3)感受态细胞来源于BL21(DE3)菌株,含有rne131基因突变体,rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性,从而提高蛋白表达能力。主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达。BL21 Star(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg。


操作说明

1、取100μl冰上融化的BL21 Star(DE3)感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基,混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注 意:

1.Brian Caliendo (Voigt 实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中,而pCP20转化到其他菌株中都很正常,但是菌体原因未知。

2.即使不加葡萄糖,BL21(AI) 细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低,加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。



注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。 

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5.为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间、温度以及IPTG浓度需实验者优化




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