BL21 Star(DE3) 感受态细胞

基因型

F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)

简要说明

BL21 Star(DE3)感受态细胞来源于BL21(DE3)菌株，含有rne131基因突变体，rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而提高蛋白表达能力。主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达。BL21 Star(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg。

操作说明

1、取100μl冰上融化的BL21 Star(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注 意：

1.Brian Caliendo (Voigt 实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中，而pCP20转化到其他菌株中都很正常，但是菌体原因未知。

2.即使不加葡萄糖，BL21(AI) 细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低，加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间、温度以及IPTG浓度需实验者优化