Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

S17-1 λpir Chemically Competent Cell

基因型：

RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1,thiE1, hsdR17, creC510

简要说明：

S17-1λpir菌株的染色体中整合了RP4-2质粒，该质粒可以携带染色体的部分DNA在接合菌株之间转移。S17- 1λpir菌株缺失核酸内切酶 (endA1)，提高了质粒DNA的产量和质量；同时为重组酶缺陷型 (recA1)，减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性。Tn7赋予该菌株弱的 lian霉素抗性。 S17-1λpir感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1×108 cfu/μg DN

操作说明：

1. S17-1λpir感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。 

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。 

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养（12-15 h）。

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 

2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。