Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

DB3.1 Chemically Competent Cell

基因型：

F- gyrA462 endA1 glnV44 (sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)ara14galK2lacY1proA2rpsL20(Smr) xyl5 Δleu mtl11

简要说明：

DB3.1大肠杆菌菌株基因组中含有 gyrA462 基因，赋予其对ccdB毒性基因的抗性，特别适用于构建或扩繁含有ccdB基因的质粒载体（例GATEWAY System vector) ，此菌株具有链MRI-素抗性。 High5TM系列DB3.1感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

操作说明：

1.DB3.1感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA并用指尖轻轻打管底混匀(避免用枪吸打)，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB无菌培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 混入目的DNA时应轻柔操作。 

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。