R5421 酵母感受态细胞

基因型

MATα ura3-52 leu2 trk1Δhis3Δ200 his4-15trk2Δ1::pCK64

简单说明：

1、R5421酿酒酵母菌株为K+/钾离子缺陷型菌株，在文献中也称为CY162，MATα型，多用于K+/钾离子转运蛋白的鉴定试验中，也可用于K+/钾离子通道或钠钾离子泵的鉴定试验。Transformation marker为：ura3，leu2，该菌株可以在含有100mM KCl的培养基中正常生长，在含有5-10mMKCl的培养基中生长缓慢，当培养基中KCl浓度低于0.5mM，R5421（CY162）细胞停止生长。R5421感受态细胞经特殊工艺制作，pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

操作说明

1、取一支无菌的1.5ml EP管，依次加入预冷的目的质粒1-3µg，Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴，重复一次)，100µl冰上融化的感受态细胞，PEG/LiAc 500µl，轻轻翻转混匀6-8次； 

2. 30℃水浴30min，每10min轻轻翻转混匀6-8次；

3. 每支加入20µl的二甲基亚砜；（用于提高转化效率,可不做）4. 42℃水浴15min，每5min轻轻翻转混匀6-8次；5. 12000rpm瞬时离心弃上清，每支加入1ml的YPDPlus于30℃复苏1h；（用于提高转化效率，可不做）6. 12000rpm瞬时离心弃上清，用100µl 0.9%NaCl重悬，涂板，30℃培养48-96h。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2. PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温下溶解后使用。