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Chemically 酵母感受态细胞

简要描述:lNVSc1 Chemically Competent Cell/Chemically 酵母感受态细胞
保存条件:-80℃

  • 产品型号:lNVSc1
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-27
  • 访  问  量:106

详细介绍

品牌Abnbio货号ABG706-50
规格50支100ul供货周期现货
主要用途细胞培养应用领域化工,生物产业,制药

lNVSc1 Chemically Competent Cell  酵母感受态细胞

基因型:

MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2trp1-289 ura3-52

简要说明:

INVSc1菌株是专门用来做重组蛋白表达的宿主酵母,pYES2质粒与INVSc1酵母配套使用,激活pYES2质粒的GAL1启动子的转录进而启动下游重组蛋白的表达。INVSc1为合子型,可直接通过PEG/LiAc将pYES2质粒转化进入INVSc1细胞内。质粒pYES2的筛选标志为URA,可用SD-URA板进行筛选。INVSc1感受态细胞经特殊工艺制作,pYES2质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。

操作说明:

1. 取pBait-AbAi质粒5µg,BstBI或 BbsI酶切1h,回收;

2. 取一支无菌的1.5ml EP管,依次加入预冷的预冷的线性pBait-AbAi质粒1-5 µg(体积不高于15 µl),Carrier DNA(95-100 度5min 快速冰浴,重复一次)10µl,100µl冰上融化的Y1HGold感受态细胞,PEG/LiAc 500µl,轻轻翻转混匀6-8次;

3. 30℃水浴30min,每10min轻轻翻转混匀6-8次;

4. 每支加入20µl的二甲基亚砜(用以提高转化效率,可不做);

5. 42℃水浴15min,每5min轻轻翻转混匀6-8次;

6. 12000rpm瞬时离心弃上清,每支加入1ml的YPD Plus(YPDA)于30℃复苏1h(用以提高转化效率,可不做);

7. 12000rpm瞬时离心弃上清,用100µl 0.9% NaCl重悬,涂板,30℃培养48-96h。

注意事项:

1.PEG在低温下易析出,请在常温下wan全溶解后使用。

2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。

4.Y1HGold酵母菌株对高温敏感,最适生长温度为27-30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。

5.菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,Y1HGold的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylaminoimidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。

6.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆。







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