咨询热线

18156995113

当前位置:首页   >  产品中心  >  Abnbio感受态细胞  >  根癌(电击)感受态  >  LBA4404Electroporation根癌(电击)感受态细胞

Electroporation根癌(电击)感受态细胞

简要描述:LBA4404 Electroporation-Competent Cell/ Electroporation根癌(电击)感受态细胞
保存条件:-80℃

  • 产品型号:LBA4404
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-27
  • 访  问  量:90

详细介绍

品牌Abnbio货号ABN606-50
规格50支50ul供货周期现货
主要用途细胞培养应用领域化工,生物产业,制药

LBA4404  Electroporation-Competent Cell   根癌(电击)感受态细胞

基因型:

Ach5 (rif R) Ti pAL4404 (strepR)

简要说明:

LBA4404菌株为Ach5型背景,核基因中含有筛选标签——li福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404,此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。 pAL4404型Ti质粒含有筛选标签:strep,赋予LBA4404菌株lian霉素抗性,适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。 LBA4404电转感受态特别适用于大质粒的转化:经pCAMBIA2301质粒(size:11633bp)检测转化效率可达104cfu/μg;经pCAMBIA2301-ZH质粒(size:40kd)检测转化效率可达103cfu/μg。

操作说明:

1.0.2cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。

2.取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入1-5ug质粒DNA(质粒体积不大于6ul,最好用试剂盒抽提,双蒸水溶解),用手bo打管底混匀,立即插入冰中,用200ul枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。

3.启动电转仪,设置参数:C=25uF,PC=200ohm,V=2400V(此参数为Biorad 推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中,加入700ul 无抗生素的LB并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。

4.6000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50ug/ml kan 时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h)。

注意事项:

1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ;质粒不纯或存在盐,乙醇等污染,转化效率急剧下降;若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.li福平浓度不应高于25ug/ul,过高的li福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50ug/ml kan,若所用平板含有20ug/ml rif则转化效率降低到1/2。

5.培养基中加入li福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入lian霉素或qing大霉素可防止Ti质粒丢失,但lian霉素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑lian霉素或请大霉素,Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。






产品咨询

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

联系我们

合肥恩派尔贸易有限公司 公司地址:安徽省合肥市高新区黄山路624号桑夏精英时代广场507室   技术支持:化工仪器网
  • 联系人:刘畅
  • QQ:3644884546
  • 公司传真:4009005473
  • 邮箱:3644884546@qq.com

扫一扫 更多精彩

公众号

小程序