ArcticExpress(DE3) 感受态细胞

基因型

E.coli B F– ompT hsdS(rB–mB–) dcm+TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]

简要说明

ArcticExpress (DE3)来源于E. coli B，为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株，可促进表达蛋白的稳定。ArcticExpress(DE3)菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区，使得ArcticExpress(DE3)菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，广泛用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。ArcticExpress(DE3)菌株具有四环素，qing大霉素抗性，endA1突变有利于质粒DNA的稳定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress(DE3)可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60（来自嗜冷菌—Oleispira antarctica）。Cpn10和Cpn60伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性，在ArcticExpress (DE3)细胞中表达时，可降低重组蛋白包涵体的形成，增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性，比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融性能。ArcticExpress (DE3)感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg DNA。

操作说明

1、ArcticExpress (DE3) 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨EP管底混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率

3. 向离心管中加入700 µl不含抗生素的无菌LB培养基，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

 4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 µl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上（平板中务必同时含有34µg/ml的lu霉素，40µg/ml的qing大霉素和转化质粒本身的筛选抗生素；若质粒浓度较高，也可稀释后涂板，务必保证能在平板上挑到单克隆菌落）。 

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有40ug/ml的、qing大霉素，以防质粒丢失。

3. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

4. ArcticExpress (DE3)感受态细胞具有四环素、qing大霉素抗性，不可用于具有四环素、qing大霉素抗性质粒的转化。