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ArcticExpress(DE3) 感受态细胞

简要描述:ArcticExpress(DE3) 感受态细胞 保存条件:-80℃ 基因型E.coli B F– ompT hsdS(rB–mB–) dcm+
TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]

  • 产品型号:ABG225-50
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-27
  • 访  问  量:79

详细介绍

品牌Abnbio货号ABG225-50
规格50X100ul供货周期现货
主要用途感受态细胞应用领域环保,食品,化工,生物产业,制药

基因型

E.coli B F– ompT hsdS(rB–mB–) dcm+TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]


简要说明

ArcticExpress (DE3)来源于E. coli B,为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株,可促进表达蛋白的稳定。ArcticExpress(DE3)菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区,使得ArcticExpress(DE3)菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,广泛用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。ArcticExpress(DE3)菌株具有四环素,qing大霉素抗性,endA1突变有利于质粒DNA的稳定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress(DE3)可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60(来自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性,在ArcticExpress (DE3)细胞中表达时,可降低重组蛋白包涵体的形成,增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性,比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融性能。ArcticExpress (DE3)感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg DNA。


操作说明

1、ArcticExpress (DE3) 感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,待菌块融化,加入目的质粒,并用手拨EP管底混匀,冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率

3. 向离心管中加入700 µl不含抗生素的无菌LB培养基,混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。

 4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 µl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上(平板中务必同时含有34µg/ml的lu霉素,40µg/ml的qing大霉素和转化质粒本身的筛选抗生素;若质粒浓度较高,也可稀释后涂板,务必保证能在平板上挑到单克隆菌落)。 

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注意事项

1、感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有40ug/ml的、qing大霉素,以防质粒丢失。

3. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。

4. ArcticExpress (DE3)感受态细胞具有四环素、qing大霉素抗性,不可用于具有四环素、qing大霉素抗性质粒的转化。













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