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Chemicall根癌(热激)感受态细胞

简要描述:EHA101 Chemically Competent Cell/ Chemicall根癌(热激)感受态细胞
保存条件:-80℃

  • 产品型号:EHA101
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-27
  • 访  问  量:109

详细介绍

品牌Abnbio货号ABN509-100
规格100支100ul供货周期现货
主要用途细胞培养应用领域化工,生物产业,制药

EHA101 Chemically Competent Cell  根癌(热激)感受态细胞

基因型:

C58 (rif R) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kanR, strepR)Nopaline

简要说明:

EHA101菌株为C58型背景,核基因中含有筛选标签——li福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101 (pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pEHA101(pTiBo542DT-DNA) 型Ti质粒含有筛选标签:strep、kan,赋予EHA101菌株lian霉素抗性和ka那霉素抗性,适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作,经pK7WGF2质粒检测转化效率可达104 cfu/μg DNA

操作说明:

1.取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。

2.每100μl感受态加1ug(体积不大于10ul)质粒DNA,用手bo打管底混匀,依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3.加入700μl无抗生素的LB或YEB液体培养基,于28℃振荡培养2~3小时。

4.6000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50ug/ml kan 时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h)。

注意事项:

1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.LI福平浓度不应高于25ug/ul,过高的LI福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50ug/ml kan,若所用平板含有20ug/ml rif则转化效率降低到1/2。

5.培养基中加入LI福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌;根据所用菌株抗性加入LIAN霉素或QING大霉素可防止Ti质粒丢失,但LIAN霉素不利于农杆菌的转基因操作,所以一般培养农杆菌时不考虑LIAN霉素或QING大霉素,Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。












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