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Rosetta-gami 2(DE3) 感受态细胞

简要描述:Rosetta-gami 2(DE3) 感受态细胞 保存条件:-80℃ 基因型D(ara-leu)7697 DlacX74 DphoA PvuII phoRaraD139ahpCgalE galK rpsL (DE3) F’[lac+ lacIq pro]gor522::Tn10trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR)

  • 产品型号:ABG211-50
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-25
  • 访  问  量:82

详细介绍

品牌Abnbio货号ABG211-50
规格50X100ul供货周期现货
主要用途感受态细胞应用领域环保,食品,化工,生物产业,制药

基因型

D(ara-leu)7697 DlacX74 DphoA PvuII phoRaraD139ahpCgalE galK rpsL (DE3) F’[lac+ lacIq pro]gor522::Tn10trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR)


简要说明

Rosetta-gami 2(DE3) 菌株集合了Rosetta 2和Origami2两种菌株的优点: pRARE2赋予其Rosetta2菌株的优点——补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA,CUA,CCC,GGA和CGG)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平。gor522::Tn10trxB赋予其Origami2菌株的优点——突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和gu胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因,它们是还原途径的两个关键酶,其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性;同时该菌株不具有卡na霉素抗性,可用于具有卡na霉素抗性质粒的蛋白表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)适合T7启动子诱导的蛋白表达。Rosetta-gami2(DE3)菌株具有lu霉素,lian霉素,四环素抗性,由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/μg DNA。


操作说明

1、Rosetta-gami 2(DE3)菌株感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手拨EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4.5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注意事项

1、感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。

5.为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。








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