当前位置:首页 > 产品中心 > Abnbio感受态细胞 > 表达 感受态细胞 > ABG210-50Rosetta 2(DE3) 感受态细胞
Cassification
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详细介绍
品牌 | Abnbio | 货号 | ABG210-50 |
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规格 | 50X100ul | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 感受态细胞 | 应用领域 | 环保,食品,化工,生物产业,制药 |
基因型
F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3) pRARE(argU,argW,ileX,glyT,leuW,proL)(CamR)
简要说明
Rosetta(DE3) 感受态细胞具有lu霉素抗性,补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA,AGG, AGA, CUA,CCC,GGA) 对应的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平,该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),同时表达T7RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。Rosetta(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
操作说明
1、Rosetta 2(DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手拨EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的LB无菌培养液,37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1、感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-10 mM均可)。
4. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
5. Rosetta 2(DE3) 菌株携带pRARE2质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34µg/mllu霉素,以防质粒丢失。
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