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BL21(AI) 感受态细胞

简要描述:BL21(AI) 感受态细胞 感受态细胞 保存条件:-80℃ 基因型F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

  • 产品型号:ABG203-50
  • 产品品牌:Abnbio
  • 更新时间:2024-03-25
  • 访  问  量:60

详细介绍

品牌Abnbio货号ABG203-50
规格50X100ul供货周期现货
主要用途感受态细胞应用领域环保,食品,化工,生物产业,制药

基因型

F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA


简要说明

BL21(DE3)pLysS 感受态细胞携带pLysS质粒,具有氯mei素抗性。pLysS含有表达T7 溶jun酶的基因,T7溶jun酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),BL21(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。


操作说明

1、取100μl冰上融化的BL21(AI)感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基,混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含抗生素的2YT 或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注 意:

 1.Brian Caliendo (Voigt 实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中,而pCP20转化到其他菌株中都很正常,但是菌体原因未知。

 2.即使不加葡萄糖,BL21(AI) 细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低,加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。



注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5.为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。


建议选择该菌株进行蛋白表达的条件如下:1.使用T7启动子载体(高拷贝或者低拷贝都可以)进行蛋白表达。2.使用其他BL21进行蛋白表达时,观察到明显的细菌生长的抑制作用。3.表达一个已知的毒性蛋白。




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