BL21(AI) 感受态细胞

基因型

F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

简要说明

BL21(DE3)pLysS 感受态细胞携带pLysS质粒，具有氯mei素抗性。pLysS含有表达T7 溶jun酶的基因，T7溶jun酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区（DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶），BL21(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。

操作说明

1、取100μl冰上融化的BL21(AI)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含抗生素的2YT 或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注 意：

 1.Brian Caliendo (Voigt 实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中，而pCP20转化到其他菌株中都很正常，但是菌体原因未知。

 2.即使不加葡萄糖，BL21(AI) 细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低，加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。

注意事项

1、感受态细胞最好在冰上融化。

2.混入质粒时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。

5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

建议选择该菌株进行蛋白表达的条件如下：1.使用T7启动子载体（高拷贝或者低拷贝都可以）进行蛋白表达。2.使用其他BL21进行蛋白表达时，观察到明显的细菌生长的抑制作用。3.表达一个已知的毒性蛋白。