Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

MG1655 Chemically Competent Cell

基因型：

K12 F- llambda- ilvG- rfb-50 rph-1

简要说明：

MG1655菌株来源于W1485，是K12的衍生菌株，是一种经过较少改造，比较接近于“WT-野生型"的大肠杆菌工程菌株。MG1655外观形态标准，同时可做为扩增大肠杆菌WT型基因的模板使用，也可作为蛋白表达的宿主菌株使用，但不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶，以防提取的质粒被降解。pUC19质粒检测转化效率>0.5×108 cfu/μg DNA。

操作说明：

1.感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手bo打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰上融化。冰上放置大约5分钟即可融化，融化后8分钟内加入质粒， 否则会影响转化效率。 

2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。 

3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。