Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

MC1061F- Chemically Competent Cell

基因型：

araD139 Δ (araA-leu)7697 Δ(lac)X74 galK16 galE15(GalS)lambda- e14- mcrA0 relA1 rpsL150(StrR) spoT1 mcrB1 hsdR2

简要说明：

MC1061F-菌株来源于E.coli B/r型SB3118菌株，同时也是DH10b及TOP-10的母本菌株。MC1061F-化转感受态细胞转化效率ji高，可用作实验室的常规质粒构建及噬菌体展示实验，但缺乏F`因子，不能用于丝状噬菌体（比如M13）的感染。不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶对质粒的污染。此菌株具有lian霉素抗性。 MC1061F-感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>2×109 cfu/μg DNA。

操作说明：

1. MC1061F-感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手bo打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。 

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。 

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌2YT或LB培养基，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。 

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。 

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 

2. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。