Chemically Competent Cell克隆感受态细胞

基因型：

F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1

简要说明：

DH5α菌株是实验室常用的感受态细胞。 缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。DH5α菌株的缺点是生长缓慢，37℃需培12-14小时才能看见克隆；如需加快试验速度，请选用TG1，Mach1-T1，XL10-Gold等生长速度快的感受态细胞。High5TM系列DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率约1×109cfu/μg。

操作说明：

1. DH5α感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手搅打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少17h。

注意事项：

1.感受态细胞最好在冰上融化。冰上放置大约5分钟即可融化，融化后8分钟内加入质粒,否则会影响转化效率。

2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。